5.自噬對膿毒癥小鼠組織中ER應(yīng)激的影響

圖7：自噬對膿毒癥小鼠肺內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑的影響。給小鼠腹腔注射自噬誘導(dǎo)劑Rap和自噬抑制劑3-MA，12h后收集肺、肝和腎樣本。用Western印跡法測定肺組織（A和D）、肝組織（B和E）和腎組織（C和F）中p-PERK和p-eIF2α、IRE1α和XBP1、ATF6和CHOP蛋白的表達(dá)。

以前的文獻(xiàn)表明，ERS調(diào)節(jié)自噬途徑的激活。但自噬是否能調(diào)節(jié)膿毒癥中ERS的活性呢？為了回答這個(gè)問題，我們分別給予Rap和3-MA（一種誘導(dǎo)劑和抑制劑），并測量了CLP小鼠肺、肝和腎組織中的ERS蛋白水平。結(jié)果表明，與CLP組相比，3-MA加劇了CLP+3-MA組小鼠肺（圖7A和D）、肝（圖7B和E）和腎組織（圖7C和F）中p-PERK和peIF2α、CHOP、ATF4、IRE1α和XBP1表達(dá)的增加（圖7）。然而，與CLP組相比，自噬誘導(dǎo)劑Rap可抑制CLP操作誘導(dǎo)的這些指標(biāo)的增加（圖7）?？傊@些結(jié)果表明，自噬活性的增加可減輕敗血癥的ERS。

6.氫調(diào)節(jié)中毒性小鼠的ERS和自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)

圖8：氫氣通過ERS和自噬的交叉作用調(diào)控膿毒癥小鼠肺中ERS和自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)。給小鼠腹腔注射ERS誘導(dǎo)劑TM和自噬抑制劑3-MA后，在CLP12小時(shí)后收集肺樣本，通過Western印跡檢測ERS相關(guān)蛋白p-PERK（A和B）和p-eIF2α（A和C）、IRE1α（A和D）和XBP1（A和E）的表達(dá)，以及自噬相關(guān)蛋白LC3（A和F）和Beclin1（A和G）的表達(dá)。

為了進(jìn)一步研究氫氣、3-MA和TM對敗血癥小鼠ER應(yīng)激和自噬的影響，研究人員給小鼠注射了氫氣。與CLP組相比，氫氣顯著降低了CLP小鼠p-PERK、p-eIF2α、IRE1α和XBP1的表達(dá)，并增強(qiáng)了LC3II和Beclin1的表達(dá)（圖8）。然而，用ERS誘導(dǎo)劑（TM）或自噬抑制劑（3-MA）處理可減弱氫氣對CLP操作后p-PERK、p-eIF2α、IRE1α、XBP1、LC3II和Beclin1的影響（圖8）?？傊@些結(jié)果證實(shí)了氫氣可通過自噬途徑緩解膿毒癥中的ER應(yīng)激。

7.氫氣通過自噬激活和ER應(yīng)激途徑失活下調(diào)膿毒癥小鼠的炎癥反應(yīng)。

圖9:氫氣通過自噬激活和ERS抑制敗血癥小鼠肺部炎癥。給小鼠腹腔注射ERS誘導(dǎo)劑TM和自噬抑制劑3-MA后，在CLP12小時(shí)后收集肺部樣本，通過Western印跡檢測NF-κb的表達(dá)。收集血液，通過ELISA檢測細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6和HMGB1的表達(dá)。

為了驗(yàn)證自噬和ERS對敗血癥小鼠服用氫氣后炎癥的影響，我們檢測了NF-κb和細(xì)胞因子。NF-κb是各種炎癥條件下促炎信號的典型標(biāo)志物。值得注意的是，CLP手術(shù)后氫處理可減輕NF-κb的p65亞基和細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6和HMGB1（圖9）。服用3-MA或TM會降低氫氣對CLP小鼠NF-κb和細(xì)胞因子的抑制作用。這些結(jié)果表明，氫氣可通過自噬激活和ERS通路失活減輕敗血癥的炎癥反應(yīng)。

8.氫氣可防止敗血癥引起的器官功能障礙，并通過自噬激活和ERS途徑失活提高存活率

圖10:氫氣通過自噬激活和ERS抑制改善膿毒癥小鼠的器官損傷、器官功能障礙和存活率。在CLP前，給小鼠腹腔注射ERS誘導(dǎo)劑TM和自噬抑制劑3-MA。用蘇木精和伊紅（H&E）染色法檢測肺、肝和腎的病理變化。計(jì)算損傷評分水平（A、B和C）。CLP12小時(shí)后檢測肺MPO活性（A）、BLA總蛋白（B）、肺W/D（C）、ALT（D）、AST（E）、Cr（F）和BUN（G）。分析了CLP手術(shù)前、手術(shù)后1d、2d、3d、5d和7d小鼠的存活率（H）。

氫氣可防止敗血癥中的器官功能障礙和損傷。與CLP組相比，氫氣顯著改善了敗血癥的肺、肝和腎組織損傷、BLA總蛋白、MPO活性、肺W/D重量、血清AST、ALT、Cr和BUN以及存活率（圖10）。與CLP+H2組相比，3-MA或ERS誘導(dǎo)劑TM對自噬的抑制部分逆轉(zhuǎn)了氫氣對CLP+H2+3-MA組和CLP+H2+TM組上述指標(biāo)的保護(hù)作用（圖10）。這些結(jié)果表明，在膿毒癥中，氫氣通過激活自噬和ERS途徑失活，促進(jìn)對器官損傷和器官功能障礙的保護(hù)，并提高存活率。